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荧光检测器工作原理及特点

2020-09-01 06:48:37 浏览次数: 159
        荧光检测器是高压液相色谱仪常用的一种检测器。灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高,在HPLC中应用较多。它用于能激发荧光的化合物,极高灵敏度和良好选择性是它最大的优点,因而在某些领域如药物和生化分析中起着不可替代的作用。
 
  荧光检测器的工作原理是:用紫外光照射某些化合物时它们可受激发而发出荧光,测定发出的荧光能量即可定量。
 
  很多与生命科学有关的物质,如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生剂后,可以检测很微量的氨基酸和肽。
 
  1、灵敏度极高
 
  荧光检测器的灵敏度比紫外-可见光检测器的灵敏度约高两个数量级,最小检测量可达10^(-13g)。这是因为在紫外吸收检测法中,被检测的信号A=lg(Io/I),即当样品浓度很低时,检测器所检测的是两个较大信号Io及I的微小差别;而在荧光检测法中,被检测的是叠加在很小背景上的荧光强度。荧光检测器是最灵敏的液相色谱检测器,特别适合于痕量分析。愈是常用的衡量检测器灵敏度的基准物质。另外,荧光检测器的灵敏度还可以用水的拉曼谱带的信噪比来衡量。
 
  2、良好的选择性
 
  产生荧光的一个必要条件是该物质的分子具有能吸收激发光能量的吸收带,即物质分子具有一定的吸收结构;另外的条件是吸收了激发光能量之后的分子具有高的荧光效率。相对较少的分子具有大的足够检测的量子效率是荧光检测器高选择性的主要原因。在很多情况下,荧光检测器的高选择性能够避免不发荧光的成分的干扰,成为荧光检测的独特优点。图4-5-12, 中虽然紫外# 可见光检测器在265nm可以检测牛奶中的维生素B2,但却取激发波长265nm,发射波长520nm做荧光检测。因为基体成分在此条件下不存在干扰荧光,具有更准确的检测结果。
 
  3、线性范围较宽
 
  线性范围约!$* 6 !$+,虽然比紫外吸收检测器窄,但对大多数痕量分析,该线性范围已足够宽。在分析物质浓度较大时,发射强度由于内滤效应可能随浓度增加而降低。
 
  4、受外界条件的影响较小
 
  5、只要选作流动相的溶剂不会发射荧光,荧光检测器就能适用于梯度洗脱。
 
  其中,荧光检测器的极高灵敏度和良好选择性是它最大的优点,因而在某些领域如药物和生化分析中起着不可替代的作用。
 
  优点:
  ①灵敏度极高。荧光检测器的灵敏度比紫外-可见光检测器的灵敏度约高两个数量级,最小检测量可达10^(-13g)。这是因为在紫外吸收检测法中,被检测的信号A=lg(Io/I),即当样品浓度很低时,检测器所检测的是两个较大信号Io及I的微小差别;而在荧光检测法中,被检测的是叠加在很小背景上的荧光强度。荧光检测器是最灵敏的液相色谱检测器,特别适合于痕量分析。愈是常用的衡量检测器灵敏度的基准物质。另外,荧光检测器的灵敏度还可以用水的拉曼谱带的信噪比来衡量。
 
  ②良好的选择性。产生荧光的一个必要条件是该物质的分子具有能吸收激发光能量的吸收带,即物质分子具有一定的吸收结构;另外的条件是吸收了激发光能量之后的分子具有高的荧光效率。相对较少的分子具有大的足够检测的量子效率是荧光检测器高选择性的主要原因。在很多情况下,荧光检测器的高选择性能够避免不发荧光的成分的干扰,成为荧光检测的独特优点。
 
  ③线性范围较宽。虽然比紫外吸收检测器窄,但对大多数痕量分析,该线性范围已足够宽。在分析物质浓度较大时,发射强度由于内滤效应可能随浓度增加而降低。
 
  ④受外界条件的影响较小。
 
  ⑤只要选作流动相的溶剂不会发射荧光,荧光检测器就能适用于梯度洗脱。
 
  缺点:
 
  ①荧光检测器的高选择性优点在一些情况下,也是该检测器的缺点。因为不是所有的化合物在选择的条件下都能发生荧光,所以荧光检测器不属于通用型检测器,与紫外-可见光检测器相比,应用范围较窄。
 
  ②对通常发生在荧光测量中的一些干扰非常敏感,如背景荧光和猝灭效应等。虽然这些干扰在液相分析中不经常遇到,但在进行定量分析时,有必要验证这些干扰是否存在,以及对样品测定的影响程度。尤其对某些物质,如卤素离子、重金属离子、氧分子及硝基化合物等,都应予以特别注意。
 
  1、用于食品工业、化妆品制造业、医疗单位卫生监测。
 
  2、配合专用试剂,可对测液体、固体食品、表面等微生物总数做快速评估。
 
  1、将荧光剂按一定比例加入到系统内,加入荧光剂后向系统内补充适量的冷媒以便把荧光剂安全推入系统内。
 
    2、系统运行20分钟以后便可戴上专用眼镜,用检漏仪照射系统的外部,泄漏点呈明亮的黄色。
 
  3、如漏点极小,建议你隔一天用紫光灯仔细检查系统管路。
 
  4、如果有些地方看不到,你可以用一个反光镜,放在要检查的地方,用紫光灯照射反光镜,就可以看到隐蔽地方是否泄漏,也可以用一块干净的抹布擦一下怀疑泄漏的地方,然后用紫光灯照射抹布看是否有荧光剂存在。
 
  5、复检时应注意:维修好渗漏点,应清洗残留在系统外部的荧光剂,运行系统后,用荧光灯检查已维修部位,以确保渗漏已经修好。

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